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革兰氏阴性菌的细胞破壁方法及原理
发布时间:2021-05-07 02:33

  1.研磨法,可用的研磨剂有氧化铝、玻璃珠、玻璃粉等。可以手动在研钵里磨,也可以研磨机。原理是:在细菌悬液中加入研磨剂,研磨时研磨剂颗粒碰撞而破碎细胞。

  2.超声波法,使用超声波破碎仪,破碎细胞时要注意温度,可能的话最好冰浴。原理是:利用超声波对细胞内所产生的空穴作用破菌,同时超声过程产生的漩涡对菌体也有剪切力,有助于破菌。

  3.压力法,分为两种:a.气压法,就是对样品罐加压,使菌体内压力增加,然后泄压,此时菌体内压力高于外界,菌体自身涨破。现在使用的不多了,老一点的英文文献中又提到过。b.高压均质机的破菌过程。原理是:细胞悬液以极快的速度撞击静止面,使菌体破碎。nba直播!工业生产中应用较多。

  4.渗透法,将悬液与高渗透压液体中平衡,再转移至低渗透压液体中,此时大量水分渗入细胞,使细胞破裂。只适合于胞壁较弱的革兰氏阴性菌。可以和其他方法联合使用。

  6.酶解法,使用最多的方法,分为菌体自溶和溶菌酶两种方法。菌体自溶可以在如大肠杆菌培养时浇入低浓度抗生素,干扰胞壁形成,有助于菌自溶,但条件要摸索,不能干扰菌的生长。溶菌酶就是水解1,4-糖苷键,破坏胞壁中的肽聚糖,对阳性菌作用较大。对于阴性菌,因为存在脂多糖,必须加入EDTA,这样可以螯合连接相邻脂多糖的Ca、Mg离子,从而破坏脂多糖。同样,去垢剂如Triton SDS也可以一起加入,破坏脂多糖。